混合酸类脱钙剂:
是指两种酸类脱钙剂一起使用,或在单纯酸内加入另一种脱钙剂或少量的其他试剂所配制的脱钙液,这类脱钙液的特点是脱钙完全、快速,防止纤维组织过度膨胀,减少组织破坏对染色的影响,通过加入不同的化学成分可以弥补单纯酸类脱钙剂的不足。
1、甲酸-福尔马林液
配方:甲酸5-25ml,福尔马林5ml,蒸馏水加至100ml。
5%的甲酸是一种良好的常规脱钙剂,速度适当,组织损害小。当甲酸成分增至25%则增快脱钙速度,加入甲醛可适当保护组织不受酸损害,但应切记,增加脱钙速度只能靠牺牲细胞微细构造来获得。根据组织的厚度和钙化程度,在5%甲酸液内2-4天可完全脱钙,横切的肋骨需36-48小时。
2、福尔马林-硝酸液(Clayden氏液)
配方:福尔马林5ml,硝酸(比重1.41)7.5-15ml,蒸馏水加至100ml。
此处方中甲醛可部分地抑制硝酸的浸软作用,这即具有脱钙作用,又具有固定作用,硝酸脱钙迅速,组织不膨胀,掌握好脱钙时间可直接脱水,不影响染色效果,但最好先洗去硝酸。横切人肋骨(5mm)用含7.5%硝酸液于1-2天内脱钙。
3、盐酸-氯化钠液(Von Ebner氏液)
配方:浓盐酸15ml,氯化钠7.5ml,蒸馏水加至100ml。
盐酸脱钙易使组织收缩,作用速度较快,用氯化钠作为溶剂则效果良好,牙齿脱钙时盐酸可增至10-20%。脱钙时,每日应加盐酸(0.5%)直至完成脱钙,横切的人肋骨(5毫米厚度)于36-72小时内脱钙。
EDTA:
是一种比较温和的脱钙剂,对组织的渗透性差作用慢。溶液的优选pH为中性至微酸性,适用于将进行酶测试、FISH和免疫组化。为了提高EDTA的脱钙速度,骨组织取材尽量薄小,可采用微波辅助。用微波炉辅助脱钙可以大大缩短脱钙时间,只要设置好脱钙程序、严格控制好温度和脱钙时间,一般不会对组织造成影响。
总的来说,各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。
脱钙步骤简要概述如下:
取材:骨组织固定于10%福尔马林24小时后再锯取厚度约0.5厘米骨片;
固定:再以10%福尔马林固定2天;
将组织置于脱钙剂中,每日更换新鲜液、直至组织软化为止;
流水冲洗24小时(除酸);
进行常规脱水,透明,浸蜡,切片。
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